前言:我們大家都知道生物實(shí)驗(yàn)中有個(gè)重要的實(shí)驗(yàn)就是酶特性的實(shí)驗(yàn),那么在做實(shí)驗(yàn)時(shí)有一個(gè)用來對(duì)酶進(jìn)行做標(biāo)記的儀器就是酶標(biāo)儀,我們并不是特別的了解酶標(biāo)儀,知識(shí)知道它的作用而已。下面就由小編為大家做一下酶標(biāo)儀的簡(jiǎn)單介紹,希望對(duì)大家了解酶標(biāo)儀有所幫助。
酶標(biāo)儀介紹:主要由光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、探測(cè)器和微處理器控制系統(tǒng)等組成
酶標(biāo)儀原理:實(shí)際上就是一臺(tái)變相的光電比色計(jì)或分光光度計(jì),其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同. 如圖是一種單通道自動(dòng)進(jìn)樣的酶標(biāo)儀工作原理圖.
光源燈發(fā)出的光線經(jīng)過濾光片或單色器后,成為一束單色光。該單色光束經(jīng)過酶標(biāo)板中的待測(cè)標(biāo)本,被標(biāo)本吸收掉一部分后,另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上,光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào)。光電檢測(cè)器將投照到上面的光信號(hào)的強(qiáng)弱轉(zhuǎn)變成電信號(hào)的大小。此電信號(hào)經(jīng)前置放大、對(duì)數(shù)放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換等處理后,送人微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算,較為后通過顯示器和打印機(jī)輸出測(cè)試結(jié)果。
酶標(biāo)儀的分類:
按照濾光方式的不同可分為:濾光片式的酶標(biāo)儀和光柵式酶標(biāo)儀
按照功能可以分為:光吸收酶標(biāo)儀,熒光酶標(biāo)儀,化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀和多功能的酶標(biāo)儀
濾光片式的酶標(biāo)儀:采用濾光片來進(jìn)行波長(zhǎng)的選擇,酶標(biāo)儀內(nèi)置濾光片輪,可選擇試驗(yàn)所需的不同波長(zhǎng)的濾光片來進(jìn)行分光,光源發(fā)出的全波譜光經(jīng)過濾光片后,大部分被過濾,只剩下濾光片本身允許的波長(zhǎng)通過,這樣就可就通過濾光片來獲得特定的波長(zhǎng)
光柵式酶標(biāo)儀:采用光柵進(jìn)行分光,光源發(fā)出的全波譜光線經(jīng)過光柵后,通過光柵上面分布的一系列狹縫的分光,就可以獲得任意波長(zhǎng)的光,波長(zhǎng)連續(xù)可調(diào),一般遞增量為1nm.
光吸收酶標(biāo)儀:用來進(jìn)行可見光與紫外光吸光度的檢測(cè).特定波長(zhǎng)的光通過微孔板中的樣品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關(guān)系,由此可以用來定性和定量的檢測(cè)。
熒光酶標(biāo)儀:用來進(jìn)行熒光的檢測(cè).通過激發(fā)光柵分光后的特定波長(zhǎng)的光照射到被熒光物質(zhì)標(biāo)定的樣品上后,會(huì)發(fā)出波長(zhǎng)更長(zhǎng)的發(fā)射光,通過發(fā)射光柵后到達(dá)檢測(cè)器.熒光的強(qiáng)度與樣品的濃度呈一定的比例
化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀:來自生物化學(xué)反應(yīng)中的自發(fā)光,可分為輝光型和閃光型兩種類型.輝光型發(fā)光持久,穩(wěn)定,能持續(xù)一段時(shí)間;閃光型發(fā)光時(shí)間短,變化快,穩(wěn)定性不強(qiáng),需要應(yīng)用自動(dòng)加樣器才可以進(jìn)行
多功能的酶標(biāo)儀:可以同時(shí)進(jìn)行光吸收,熒光和化學(xué)發(fā)光的檢測(cè)
優(yōu)缺點(diǎn):
名稱: | 優(yōu)點(diǎn): | 缺點(diǎn): |
濾光片式酶標(biāo)儀 | 通過選擇不同的濾光片 可獲得不同的波長(zhǎng) | 因?yàn)V光片固定所以波長(zhǎng)都是固定 并且濾光片價(jià)格比較昂貴 |
光柵式酶標(biāo)儀 | 使用方便靈活可以進(jìn)行全波長(zhǎng)的掃描 | 價(jià)格貴 |
光吸收酶標(biāo)儀 | 檢測(cè)檢測(cè)技術(shù)成熟,成本低,操作簡(jiǎn)單 | 動(dòng)態(tài)范圍窄,靈敏度比較低,特異性不強(qiáng) |
熒光酶標(biāo)儀 | 靈敏度高,可實(shí)時(shí)檢測(cè),使用方便,檢測(cè)模式多樣 | 易受外界干擾激發(fā)光與發(fā)射光容易互相影響 |
化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀 | 輝光型發(fā)光持久穩(wěn)定,能持續(xù)一段時(shí)間 | 閃光型發(fā)光時(shí)間短,變化快,穩(wěn)定性不強(qiáng) |
多功能的酶標(biāo)儀 | 功能強(qiáng)大,使用范圍廣避免了重復(fù)購(gòu)買 | 價(jià)格昂貴 |
酶標(biāo)儀安裝環(huán)境要求:
儀器應(yīng)放置在無磁場(chǎng)和干擾電壓的位置。
儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。
為延緩光學(xué)部件的老化,應(yīng)避免陽(yáng)光直射。
操作時(shí)環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間,環(huán)境濕度在15%-85%之間。
操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。
操作環(huán)境空氣清潔,避免水汽,煙塵。
保持干燥、干凈、水平的工作臺(tái)面,以及足夠的操作空間。
酶標(biāo)儀的檢測(cè)流程:
使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,較為后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可極大地放大反應(yīng)效果,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
酶標(biāo)儀的八大特性功能:
一、測(cè)定波長(zhǎng)。目前國(guó)內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)。
二、測(cè)定的吸光度范圍。通常,酶標(biāo)儀的吸光度測(cè)定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測(cè)定要求。早期的酶標(biāo)儀可測(cè)定的吸光度一般在0-2.5之間,但現(xiàn)在基本上都做了拓寬,可達(dá)到3.5以上,并且能保持很好的精密度與線性。
三、光學(xué)系統(tǒng)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,亦有單通道)檢測(cè),一般為硅光管或光導(dǎo)纖維,除測(cè)定通道外,有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道,每次測(cè)定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何,均可通過酶標(biāo)儀測(cè)定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。
四、檢測(cè)速度。酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度是指其完成比色測(cè)定所需要的時(shí)間。檢測(cè)速度快,有利于提高檢測(cè)的精密度,即避免由于測(cè)定過程中,因測(cè)定時(shí)間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場(chǎng)上常見的酶標(biāo)儀檢測(cè)速度都非???,通常在數(shù)秒鐘內(nèi)。
五、震板功能。酶標(biāo)儀的震板功能是指酶標(biāo)儀在對(duì)ELISA板孔進(jìn)行比色測(cè)定前對(duì)其進(jìn)行振蕩混勻,使板孔內(nèi)顏色均一。目前市場(chǎng)上常見的酶標(biāo)儀均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋轉(zhuǎn)等方式及振蕩幅度等任意調(diào)節(jié)。
六、溫育功能。溫育功能是指酶標(biāo)儀本身能按要求自動(dòng)地控制儀器內(nèi)部的溫度,使得ELISA測(cè)定中微孔板條的溫育過程可在儀器內(nèi)部完成,而無需再外配溫箱。目前,只有少部分酶標(biāo)儀具有此種功能
七、軟件功能。軟件功能是指酶標(biāo)儀所具有的對(duì)ELISA定性和定量測(cè)定及其他測(cè)定方式如酶標(biāo)動(dòng)力學(xué)、紫外和凝集等數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析并報(bào)告結(jié)果的功能。軟件功能是中酶標(biāo)儀的一個(gè)非常重要的功能。如果硬件方面區(qū)別不大,則軟件就成為判定酶標(biāo)儀優(yōu)劣的惟一指標(biāo)。對(duì)于用戶來說,好的軟件功能,對(duì)實(shí)際工作會(huì)有較大的幫助。
八、語(yǔ)言界面。通常進(jìn)口的中酶標(biāo)儀人機(jī)對(duì)話多采用英文。這對(duì)于某些基層實(shí)驗(yàn)室可能會(huì)存在語(yǔ)言方面的困難,從而難以較為大限度地發(fā)揮酶標(biāo)儀的作用。為解決這方面的問題,已有一些酶標(biāo)儀采用了中文界面
酶標(biāo)儀使用時(shí)注意事項(xiàng):
在測(cè)量過程中,請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板,以免酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手
請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成后請(qǐng)洗手。
儀器如果接觸過污染性或傳染性物品,請(qǐng)進(jìn)行清洗和消毒
洗板要洗干凈。盡量使用洗板機(jī)洗板,避免交叉污染。
嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作,反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確。
使用加液器進(jìn)行加液,加液頭不能混用。
不要在測(cè)量過程中關(guān)閉電源。
對(duì)于因試劑盒問題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差,可以根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù),以達(dá)到較為佳效果。
使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害,請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明,以防對(duì)操作人員造成損害。
使用后蓋好防塵罩。
出現(xiàn)技術(shù)故障時(shí)應(yīng)及時(shí)與廠家,切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。
常見故障:
1、打印機(jī)不工作
酶標(biāo)儀后部DIL開關(guān)設(shè)置不正確。
酶標(biāo)儀內(nèi)置打印機(jī)開關(guān)處于開的位置。在總參數(shù)中設(shè)置內(nèi)置打印機(jī)為關(guān)。
打印機(jī)無紙或紙未裝好,請(qǐng)裝好打印紙。
打印機(jī)未聯(lián)機(jī),請(qǐng)確認(rèn)打印機(jī)上的聯(lián)機(jī)鍵已聯(lián)機(jī)
打印機(jī)接口接錯(cuò)(接在了計(jì)算機(jī)接口上了)。應(yīng)將打印機(jī)接在DIL開關(guān)正下方的打印機(jī)接口上,RS-232接口為計(jì)算機(jī)接口。
打印機(jī)聯(lián)線有問題:有些配備的新打印機(jī)聯(lián)線仍有問題,請(qǐng)確保打印機(jī)聯(lián)線無問題。
打印機(jī)有開機(jī)順序,需先開打印機(jī),后開儀器;有的需先開儀器,后開打印機(jī)。
2、調(diào)不出所編輯程序
如在臨界值模塊下編輯儲(chǔ)存的程序必須要在臨界值模塊下調(diào)出。
空白或陰性位置不正確。
肉眼結(jié)果與酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果差異較大。
濾光片設(shè)置不正確:請(qǐng)?jiān)?ldquo;參數(shù)”中按濾光片輪中實(shí)際的情況設(shè)置濾光片。
酶標(biāo)儀的應(yīng)用范圍:不僅應(yīng)用在醫(yī)療行業(yè),用于酶聯(lián)免疫學(xué)的檢測(cè)工作,而且在食品衛(wèi)生,農(nóng)業(yè),畜牧等產(chǎn)業(yè)以及各高等院校實(shí)驗(yàn)室中都有廣泛的應(yīng)用。
在醫(yī)學(xué)上采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行血液學(xué),免疫學(xué),腫瘤免疫學(xué),傳染病免疫學(xué),優(yōu)生優(yōu)育的血清學(xué)及基因?qū)嶒?yàn)。檢測(cè)項(xiàng)目主要包含以下幾項(xiàng):
1,傳染病類:例如肝炎,艾滋病,衣原體,肺炎支原體,梅毒,水痘等
2,甲狀腺:促甲狀腺激素,T3T4等
3,不孕癥:性激素六項(xiàng),泌乳素,雌三醇,生長(zhǎng)素,抗精子抗體等
4,優(yōu)生優(yōu)育:弓形蟲抗體,巨細(xì)胞病毒,風(fēng)疹病毒等
5,腫瘤標(biāo)志物:癌胚抗原,甲胎蛋白,乳腺癌,卵巢癌,膀胱癌,胃腸癌等
6,糖尿?。篊肽,胰島素,胰島素抗體,胰島素原等
7,過敏原,皮膚不耐受等
在食品以及農(nóng)畜業(yè)的檢測(cè)項(xiàng)目包括:營(yíng)養(yǎng)成分,添加劑,農(nóng)藥殘留量,菌毒素,無機(jī)毒素,抗生素激素殘留,致癌物質(zhì)殘留,有毒有害物質(zhì)污染等。
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